DigestPro MSi
Successeur du DigestPro MS, le DigestPro MSI en reprend le mode de fonctionnement et présente un certain nombre de perfectionnements :
- Nouveau robot x,y,z plus précis pour des dépôts plus précis.
- Auto vérification des calibrations avant chaque run.
- 23 réactifs au lieur de 21.
- 4 positions refroidies au lieu de 2.
- Logiciel de pilotage et d’établissement des protocoles moderne et intuitif.
- Nombre de températures illimité et contrôlées depuis le logiciel jusqu’à 80°C.
Principe de fonctionnement de la partie digestion :
Le DigestPro MSi ( i pour improved) est un instrument destiné à la digestion enzymatique des protéines suite à leur séparation sur gel 2D et au dépôt du digest sur cible MALDI.
Il automatise toutes les étapes d’incubation et de lavage de la procédure :
Lavage des morceaux de gel avec différents tampons.
Réduction des ponts disulfites à 60°C.
Alkylation des résidus cystéines à l’iodoacétamide.
Eliminations de l’excès de réactifs.
Equilibrage avec le tampon de digestion.
Addition d’une ou de plusieurs enzymes.
Digestion enzymatique à 37°C ou autre température
Elution des peptides hors de la matrice du gel.
Les morceaux de gel 1D ou 2D Page sont chargés dans une plaque PCR comportant une très petite ouverture en partie basse de chacun des 96 puits.
La plaque est couverte par une membrane silicone maintenue en place par un couvercle et 4 vis .
La membrane est percée, permettent ainsi l’apport de réactifs par une aiguille spéciale.
Cette aiguille comporte un deuxième canal concentrique permettant de « souffler » de l’air comprimé ou de l’azote dans les puits. Les réactifs en excès sont chassés avec l’aiguille en position basse , scellant les trous de la membranes silicone.
Ce dispositif constitue un système à flux traversant (ou flux perdu) unique et sans aucune vanne.
Cette pression positive réduit les risques de contamination par des poussières atmosphériques.
De l’air propre ou de l’azote est utilisé pour purger les réactifs et l’aiguille n’est jamais en contact avec les échantillons .
La plaque réaction est maintenue sur un rack thermostaté à une température programmée dans le logiciel allant jusqu’à 80 °C. Vous pouvez programmer une température pour la réduction et une pour la digestion (voire plusieurs). Le rack a deux positions sur la zone de travail: une pour la digestion et une pour l’élution .A la fin de la réaction les peptides générés sont extraits des morceaux de gels et collectés en plaque PCR pour utilisation ultérieure.
La digestion en solution est également réalisable sur cet appareil.
Caractéristiques de la partie digestion :
Nombre d’échantillons : 96 max.
Nombre de réactifs : 23 dont 4 réfrigérés
Gamme de travail : de 250 fmol à 5 pmol.
Chauffage : jusqu’à 80 °C
Volumes : de 5 à 100 µl
Temps de travail : 10h pour 96 échantillons
Principe de fonctionnement de la partie MALDI :
Le DigestPro MSi automatise également les protocoles de préparation des échantillons et leur dépôt sur cibles MALDI.
Typiquement, les échantillons en plaques 96 puits issus de la digestion peuvent être dessalés et concentrés sur ZipTIPTM ( il est possible d’utiliser d’autres tips du commerce sur demande)
Les peptides sont ensuite élués dans un volume de matrice inférieur au µl sur cible MALDI.
Toutes les cibles du commerce ( Bruker, Applied, Shimadzu……..) sont adressables. L’utilisateur peut, si besoin, créer de nouvelles cibles grâce au logiciel.
De même toutes les techniques de dépôts sont possibles : sandwich, wet drop, anchor chips……
Le système est capable de délivrer des volumes dans une gamme de 0,5 à 100µl de matrice ou d’échantillons directement sur les cibles ou dans d’autres récipients permettant les protocoles les plus divers et les plus adaptés au besoin de l’utilisateur.
Le logiciel de pilotage est fourni avec des protocoles pré établis que l’utilisateur peut adapter pour automatiser sa méthode manuelle.
Caractéristiques de la partie MALDI :
Nombre d’échantillons : 96 max.
Volumes : de 0,5 à 100 µl
Temps de travail : de 1 à 4 h pour 96 échantillons
Le système est fournit avec un ordinateur portable sous Windows ainsi que le logiciel d’établissement des protocoles et de pilotage du système.
A chaque lancement de protocole (Digestion ou Spotting), le logiciel crée un fichier log au format «txt»
Le DigestPro MSi est plus compact que son prédécesseur et trouve sa place sur une paillasse standard
Dimensions 57 X 50 X 70 cm (L xP x H)
Poids 60 KG
L’enceinte est raccordable au système d‘extraction du laboratoire.
